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Duende Verde: Norman Osborn es un hombre sin escrúpulos, científico y delegado de Industrias Oscorp. Desarrolla un químico esperimental denominado OZ. Después de ver los efectos que la droga producía en Peter Parker tras ser mordido por la araña, se inyecta a sí mismo la fórmula. Los resultados no los esperados y se transforma en un monstruo desquiciado, con una estructura similar a la de Hulk y capaz de disparar bolas de fuego desde sus manos. Tras matar a su hijo, Carol Danvers lo mata pero acaba descrubriéndose que SHIELD lo tiene cautivo.

Doctor Octopus: El Dr. Otto Octavius es uno de los más importantes científicos a cargo de la corporaracion Osborn y un espía industrial. Los cuatro brazos que usaba para controlar materiales peligrosos  se fusionaron a su sistema nervioso y a su piel en el mismo accidente que convirtió a Norman Osborn en el Duende Verde. Los tentáculos son diferentes a los del original, construidos con nanobots, pueden modificar su forma tranformándose en garras o en lanzallamas. En el accidente, sus ojos quedaron gravemente dañados, de ahí que lleve gafas de sol, ya que se volvió muy sensible a la luz. Ha tenido un papel activo en la creación de los clones de Peter. Además, se ha descubierto que posee un poder similar al de Magneto, es decir, puede controlar el magnetismo hasta cierto nivel.

Shocker: Herman Schultz es un hombre de 33 años, mezquino y que atraca furgones de transporte de dinero. Lleva un abrigo morado y un par de gafas para proteger sus ojos, además de un par de dispositivos en sus manos que disparan ondas sónicas. No tiene habilidades para la lucha y no es nada má que una molestia para Spiderman habiendo sido derrotado en cinco ocasiones diferentes.

Camaleón: Es un ladrón de bancos disfrazado, como Spiderman con el traje y los lanzadores de telarañas idénticos a los suyos. Es el asesino del Capitán George Stacy y es atrapado por el auténtico Spiderman.

R.H.I.N.O.: Alex O’Hirn es un científico ruso que lleva un enorme traje mecanizado. Es un enemigo común de Spiderman y de Iron Man destruyendo todo a su paso.

Kingpin: Wlson Fisk es la cabeza del crimen organizado de Nueva York pero de cara al público es un empresario que posee varios edificios y compañías en la ciudad. Es un hombre alto, calvo y obeso, vestido con una chaqueta blanca, como en el universo tradicional. Entre sus empleados se cuentan a Electro y a Elektra y entre sus enemigos están Spiderman, Daredevil, la Gata Negra, el Guerrero Luna, Puño de Hierro o el Castigador.

Los Forzadores: Son matones de Kingpin, concretamente tres, Montana, experto en el manejo del látigo, el Buey muy alto y musculoso y el cabecilla Fancy Dan, maestro de artes marciales, y que destaca por su obsesión de que nadie toque sus dos pistolas doradas.

Electro: A diferencia del universo marvel original, Max Dillon obtuvo sus poderes para controlar la electricidad a través de la bioingeniería. No lleva ningún disfraz sino que es calvo con cicatrices por quemaduras. y viste un traje de cuero. Puede volverse azul cuando llega al límite de su máximo poder permitiéndole volar o realizar mayores proezas. Está en nómima de Kingpin.

Sandman: Flint Marko es su nombre de nacimiento en esta versión y tiene una mutación genética causada por un intento de recrear el Suero del Supersoldado. Sus habilidades son el poder de moldear maleablemente su cuerpo gracias a la consistencia arenosa de éste.

Kraven el Cazador: Sergei Kravinoff es un australiano que dirige su propio reality show en el que caza animales peligrosos. Su fijación se centra en Spiderman a quien intenta cazar y matar en directo para mejorar su audiencia. Peter lo derrota, lo que causa que el programa de televisión sea suspendido. Kraven trastea con su propio ADN causando que se tranforme en una bestia similar a un hombre lobo con garras colmillos y con un comprtamiento de bestia salvaje.

HobGoblin: Durante la infancia de Harry, su padre Norman Osborn, le introdujo mediante una terapia hipnótica una doble personalidad: Shaw. Éste va tomando poco a poco el control de Harry hasta que se inyecta la fórmula OZ de su padre transformándose en el HobGoblin. La bestia en la que se ha transformado es usada por SHIELD para acabar con el Duende Verde, causando que Norman mate a su propio hijo.

Hammerhead: Aparece en Ultimate X-men  como un gangster que ha asesinado a los padres de una niña pequeña. Ésta tropieza con Gámbito que decide ayudarla y carga su cráneo inorgánico de energía, haciéndolo explotar. En Ultimate Spiderman se descubre que sobrevivió. Mientras Kingpin esta huyendo de la ley intenta tomar su territorio enfrentándose a Spiderman, la Gata Negra, al Guerrero Luna y a Puño de Hierro. finalmente se queda en coma cuando Elektra le clava una daga y lo tira por una ventana.

El Buitre: Esta verisón no se llama Adrian Toomes sino Blackie Drago. Es un agente de SHIELD descontento que es contratado para matar a Donald Roxxon.

Misterio: En esta realidad, es un ladrón de bancos al que Spiderman iba a derrotar con ayuda de la policía, pero sólo logra capturar a su cómplice.

El Escorpión: Se trata de un clon enloquecido de Peter Parker con el que comparte el 94.4 % de su ADN además de algunos de sus recuerdos. SHIELD lo mantiene sedado en una de sus bases.

Mancha: No se conoce demasiado acerca de él además de que se llama Frank y que un accidente en Industrias Roxxon le dio sus poderes. Es capaz de formar portales circulares que enlazan con otra dimension. La mayor diferencia es que estos portales fluyen de su cuerpo como lava en lugar del estampado de manchas negras sobre el traje blanco.

Venom: Para empezar, el simbionte no es extraterrestre ni parece ser sintiente sino que fue creado con ingeniería genética por los padres de Eddie Brock y Peter Parker con el objetivo de curar el cáncer. El traje de Venom proteje a quien lo lleva de daños físicos e internos pero supone una gran presión psicótica para el usuario. Peter fue capaz de controlar el traje gracias a sus poderes pero cuando Eddie se probó el traje pierde el control y se transforma en la bestia musculosa similar al Venom tradicional. Debido al ADN de Peter, Eddie es capaz de lanzar telarañas orgánicas y posee una especie de sentido arácnido. En el universo Ultimate, la debilidad conocida de Venom es la electricidad pudiendo proteger a Eddie de balas o de las ondas sónicas de Shocker.

Matanza: Es una forma de vida autoregenerante originada por el Dr. Conners a apartir del traje de Venom, del ADN de Peter Parker y del suyo propio. En un inicio es un ser guiado por el instinto y sin inteligencia cuyo único objetivo es devorar ADN de sus víctimas. Tras absorber el ADN de Gwen Stacy, es capaz de replicar su “esencia”  creyendo que él mismo es Gwen. En su forma de monstruo su apariencia es similar a la de Venom con grandes ojos y colmillos además de las garras de El Lagarto. En forma humana se parece a una mezcla entre Peter y Gwen. Cuando Venom reabsorbe a Matanza, se descubre que el simbionte había creado un duplicado completamente sano de Gwen Stacy.